Jerome K. Jerome, Üç Adam Bir Tekne'nin anlatıcısı ve ana karakteridir. Kitap, büyük ölçüde onun bakış açısından yazılmıştır ve Jerome'un mizahi, ironik ve bazen de abartılı anlatımı, eserin en belirgin özelliklerinden biridir. Jerome, kronik rahatsızlıklarından muzdarip, hayata karşı melankolik bir bakış açısına sahip, ancak aynı zamanda maceraperest ve arkadaşlarına düşkün biridir.
George, Jerome'un arkadaşıdır ve kitapta bankada çalışan, sakin ve pratik bir karakter olarak tasvir edilir. Yoğun iş temposundan bunalan George, tekne gezintisini bir kaçış ve dinlenme fırsatı olarak görür. Ancak, George'un uykuya olan düşkünlüğü ve tembelliği, gezinin komik anlarına katkıda bulunur.
Harris, Jerome ve George'un diğer arkadaşıdır ve kitapta sosyal, neşeli, ancak aynı zamanda beceriksiz ve sakar bir karakter olarak çizilir. Harris, her işe atılmaya hevesli olsa da, genellikle işleri daha da karıştırır ve komik durumlara yol açar. Onun abartılı hikayeleri ve beceriksizlikleri, gezinin eğlence dozunu artırır.
Jerome, George ve Harris arasındaki arkadaşlık, Üç Adam Bir Tekne'nin temelini oluşturur. Farklı kişiliklere sahip olsalar da, birbirlerine karşı derin bir sevgi ve saygı duyarlar. Aralarındaki şakalaşmalar, atışmalar ve dayanışma, gezinin unutulmaz anlarını yaratır ve okuyucuya keyifli bir okuma deneyimi sunar.